实用肿瘤杂志

2022, (04) 299-306

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miR-34a通过靶向ATG7调节结直肠癌细胞自噬与增殖
miR-34a regulates autophagy and proliferation of colorectal cancer cells by targeting ATG7

文彩艳;李晓霞

摘要(Abstract):

目的 探讨miR-34a对结直肠癌细胞自噬和增殖的调控机制。方法 采用实时定量反转录PCR检测2019年5月至2020年5月期间中国医科大学附属第四医院结直肠癌手术切除的30例结直肠癌组织以及相应癌旁组织中miR-34a的表达水平,同时检测结直肠癌细胞(RKO、LoVo、SW480和SW620)和人正常结肠上皮细胞(FHC)中miR-34a的表达水平。通过pcDNA3.1-miR-34a转染结直肠癌细胞株SW480以过表达miR-34a。CCK-8法检测细胞活性。Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubular associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ和自噬相关基因7(autophagy associatedgene 7,ATG7)的表达。免疫荧光检测LC3荧光斑点表达。Starbase数据库分析miR-34a与ATG7的相关性,并采用荧光素酶报告基因实验验证miR-34a与ATG7的结合情况。SW480细胞共转染pcDNA3.1-miR-34a和pcDNA3.1-ATG7后,CCK-8法检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞增殖水平。结果 miR-34a在结直肠癌组织的表达低于相应癌旁组织,在结直肠癌细胞(RKO、LoVo、SW480和SW620)中的表达低于FHC细胞(均P<0.05)。过表达miR-34a 72 h后SW480细胞活性降低(P<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低(P<0.01),免疫荧光显示LC3荧光斑点减少(P<0.01)。过表达miR-34a 24 h后SW480细胞ATG7 mRNA表达降低(P<0.01)。Starbase分析结果表明,miR-34a可以靶向结合ATG7。荧光素酶报告基因实验显示,miR-34a抑制野生型ATG7-3’ UTR质粒转染的荧光素酶活性(P<0.01),而对突变型ATG7-3’ UTR质粒转染的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。共转染pcDNA3.1-miR-34a和pcDNA3.1-ATG7 72 h后,SW480细胞活性相对增加(P<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.01)。结论 miR-34a通过靶向ATG7抑制结直肠癌细胞自噬和增殖。

关键词(KeyWords): 结直肠癌;miR-34a;自噬;增殖;自噬相关基因7

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 辽宁省自然科学基金(LFWK201712)

作者(Authors): 文彩艳;李晓霞

DOI: 10.13267/j.cnki.syzlzz.2022.051

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